GenCheck® DNA Extraction Kit [TypeS/F]

GenCheckⓇ DNA Extraction Kit Type S/F は土壌及び糞便サンプルから DNA を抽出するためのキットです。抽出方法として界面活性剤による化学的な溶菌とBeads Beating による物理的な菌体破砕の併用を採用しています。また、DNA回収用メンブレンを装着したスピンカラムを用いた遠心操作でDNAを回収する方法を採用しており、簡便、迅速にDNA抽出を行うことが可能です。抽出した土壌 DNA 及び糞便 DNA は次世代シークエンサー解析やPCR-DGGE 解析を用いた土壌及び糞便微生物の群集構造解析や土壌診断、腸内細菌叢の解析等に適しています。
※ビーズによる物理破砕作業の環境がない方へ必見!破砕作業を弊社がリーズナブルな価格で請け負います。お気軽にご相談ください。

特徴

  1. (1)化学的な溶菌と物理的な菌体破砕を併用
  2. (2)Beads Beatingにより強固な細胞壁を持つ微生物からもDNA を抽出することが可能。
  3. (3)エタノール沈殿による核酸調製は不要であり、簡便、迅速にDNA抽出

内容

商品名 商品コード 容量 価格(税別)
GenCheck® DNA Extraction Kit[TypeS/F] GC002-1N 50回用
55,000円
常温保存 常温流通 使用期限:製造から2年

使用方法

実験例

実験例1: 本キットを用いて黒ボク土、火山灰から抽出したDNA溶液の吸光度測定結果

実験例2: 実施例1のDNA溶液を用いたPCR結果

●酵素:ExTaq polymerase/Takara
●プライマー:27F/1492R
●DNA鋳型量:1 ng/µl 5 µl使用(20 µl反応)/20 cycle

実験例3: 抽出方法の比較

黒ボク土壌および火山灰土壌について、以下の条件にて2反復で抽出を実施。抽出したDNAをもとにライブラリ調製を行い、次世代シーケンサーに供与して、得られたデータについて菌叢解析を行った。
※条件1がキットのプロトコールに従った条件
bead破砕 Lysis solution
条件1
条件2
条件3 -(※1)

1.Qubitによる濃度測定結果 (ng/µl)

●酵素:ExTaq polymerase/Takara
●プライマー:16SV4領域増幅プライマ―
●1stPCR条件:1ng/µl 5µl使用(20 µl反応/20 cycle) ※1 ng/µlに満たないものは、DNA抽出原液を5 µl使用
●2ndPCR条件:1stPCR product 2 µl使用(20 µl反応/8 cycle)

2.Taxa Summaries report (※2)

さらに詳しいデータをWEBブラウザでご覧いただけます
16SrRNAのV4領域のデータを用いた微生物群集構造解析の結果

3.Rarefaction Curves (※2)

さらに詳しいデータをWEBブラウザでご覧いただけます
レアファクションカーブ
※1:アルカリ処理
※2:“-beads”→条件2/“-Surfactants”→条件3

実験例4: 糞便サンプルでの本キットの利用

乳児の離乳食開始前後の糞便を採便管にて採取し、保存液から本キットでDNA抽出を実施。抽出したDNAをもとにライブラリ調製を行い、次世代シーケンサーに供与して、得られたデータについて菌叢解析を行った。

1.Qubitによる濃度測定結果(ng/µl)

●酵素:ExTaq polymerase/Takara
●プライマー:16SV4領域増幅プライマ―
●1stPCR条件:1 ng/µl 5 µl使用(20 µl反応/20 cycle) ※1 ng/µlに満たないものは、DNA抽出原液を5 µl使用
●2ndPCR条件:1stPCR product 2 µl使用(20 µl反応/8cycle)
条件 N=3 抽出後 ライブラリ調製後
離乳食開始1日前 180911_16_25_1 1.99 19
180911_16_25_2 2.31 32.4
180911_16_25_3 0.85 29.3
離乳食開始2日後 180914_16_38_1 2.33 24.5
180914_16_38_2 1.42 38.2
180914_16_38_3 1.34 32.3
離乳食開始1週間後 180919_16_07_1 1.17 34
180919_16_07_2 1.07 31.2
180919_16_07_3 1.48 31.6
離乳食開始2週間後 180926_17_45_1 1.49 24.6
180926_17_45_2 1.55 27.1
180926_17_45_3 2.2 27.5
離乳食開始3週間後 181002_16_45_1 1.85 32.1
181002_16_45_2 1.16 35.4
181002_16_45_3 1.07 30.3

2.菌叢グラフ

本解析はDADA2アルゴリズムを利用した「QIIME2」で実施いたしました。以下のブラウザにqzvファイルをドラッグしてご覧いただけます。
[Qiime2 view]

3.主座標分析(PCoA)

さらに詳しいデータをWEBブラウザでご覧いただけます
主座標分析
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