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ゲノム編集関連製品

 
CRISPR/CAS系のゲノム編集技術における高効率で簡易なノックイン/ノックアウトを実現する最適なツールを各種取り揃えております。
またゲノム編集後、目的の変異導入が得られているか確認する為のジェノタイピングサービスも充実しております。
ゲノム編集実験でお困りごとがありましたら是非ご相談ください。
 
 

＜サービス一覧＞

 

ゲノム編集ツール「Genome craft」

■ガイドRNA合成

標的とするDNA配列（~20base）をご指定いただくだけの簡単発注。
完全国内製造による高品質なガイドRNAを短納期でご提供。
Cas9とミックスして細胞に導入するだけで簡単にゲノム編集が実現。
わずらわしい発現ベクター構築や気を遣うRNA調製作業は不要。
商品コード 製品名 価格（税別） 仕様
GE-001 crRNA 10,000 円 逆相カラム精製
GE-002 tracrRNA 25,000 円 HPLC精製
GE-002F 蛍光tracrRNA-FAM 30,000 円 HPLC精製
GE-003 CRISPR/Cas RNAセット 30,000 円 crRNA+tracrRNA
GE-004 sgRNA 1種　30,000 円 3種　70,000 円 酵素合成
＞＞詳しいサービス内容を確認する　GenomeCraft　ガイドRNA
▼使用例-In vitro digestion assay
Cas9蛋白質とsｇRNA又はcrRNA+tracrRNA、基質DNA断片を混合し、DNA切断実験を行った。
37℃にて1時間インキュベート後、アガロースゲル電気泳動を行った。
バンドのシフトが確認されたことから、sgRNA、crRNA+tracrRNAとも良好なDNA切断活性が確認された。
▼使用例-In vivo Genome Editing
Cas9蛋白質とsgRNA又はcrRNA+tracrRNAを混合し、メダカ胚にインジェクションした。
4日胚まで発生させた各個体のゲノムDNAからターゲット領域をPCR増幅してheteroduplex mobility assaysにて変異の検出を行った。
下図の各レーンごとに1個体分の結果を示している。
sgRNA、crRNA+tracrRNA共に変異の存在を示す複数のバンドが観察され、高効率な変異導入ツールであることが確認された。
[データ提供] 京都大学農学研究科　応用生物科学専攻　海洋生物機能学分野　木下政人様
※sgRNA は木下ラボで合成したもの、crRNAとtracrRNA はファスマック提供品を使用。
▼使用例-ダブルノックアウト(ゼブラフィッシュ)
Cas9蛋白質と2つの遺伝子(spns2：心臓形成に関与、tyr：色素形成に関与)に対するsgRNA又はGENOME CRAFT Type CT(crRNA+tracrRNA)を混合し、
ゼブラフィッシュ胚(1-2細胞期)にインジェクションして、発生の様子を観察した。
受精1日後(上段)にGFPで染色された心臓の形成異常(白矢印)が、2日後(下段)には目の色素形成異常(黒矢印)が観察された。
これらはそれぞれspns2欠損、tyr欠損の表現型と同一である。またシークエンス解析により各遺伝子への変異導入が確認された。
[データ提供] 山梨大学大学院 総合研究部 発生生物学教室　川原敦雄 様
＊下記文献より改変
Kotani H, Taimatsu K et al. “Efficient Multiple Genome Modifications Induced by the crRNAs, tracrRNA and Cas9 Protein Complex in Zebrafish.” PLoS ONE 10(5): e0128319.
▼使用例-遺伝子ノックイン(マウス)
Cas9蛋白質とActb遺伝子対するsgRNA又はGENOME CRAFT Type CT(crRNA+tracrRNA) 、ターゲティングドナーベクターを混合し、
マウス受精卵に注入してノックインマウス(約2.5kbの遺伝子カセット導入)の作成を試みた。
注入された受精卵から生まれた仔マウスに対して、 PCRでWTアリル、ノックイン(KI)アリルの有無調べた。
sgRNAを用いた場合には仔マウス13匹中にKIマウスは得られなかったが
crRNA+tracrRNAを用いた場合では11匹中にKIマウス5匹(*)を得ることができ、
ゲノムの意図した場所へ、正確で高率に遺伝子挿入できることが確認された。
[データ提供] 東京医科歯科大学 難治疾患研究所 分子神経科学分野 相田知海 様, 田中光一 様
＊下記文献より改変
Aida, Tomomi et al. “Cloning-Free CRISPR/Cas System Facilitates Functional Cassette Knock-in in Mice.” Genome Biology 16.1 (2015): 87.

■Cas9タンパク質

N末端とC末端の両方に核移行シグナルが付いたStreptococcus pyogenes由来のCas9タンパク質。
ガイドRNAとミックスしてゲノム編集やin vitroでのDNA切断実験等にご利用いただけます。
→マイクロインジェクション、エレクトロポレーション、リポフェクション等で細胞導入可能です。
ターゲット配列のアンチセンス鎖(PAM nGGの相補鎖)のみを切断する1本鎖切断型もあります。
商品コード 製品名 価格（税別） 仕様
GE-005-S Cas9タンパク質 (100μg) 22,000円 2本鎖切断型
GE-005-L Cas9タンパク質 (100μg x3) 55,000円 2本鎖切断型
GE-006-S Cas9 D10Aﾆｯｹｰｽ (100μg) 22,000円 1本鎖切断型
GE-006-L Cas9 D10Aﾆｯｹｰｽ (100μg x3) 55,000円 1本鎖切断型
＞＞詳しいサービス内容を確認する　GenomeCraft　Cas9
▼使用例-マウス
GENOME CRAFT Cas9　protein とeGFPに対するsgRNAを混合してeGFPを発現するマウス1細胞期胚にインジェクション*し、発生4日目にその発現を観察した。またeGFP遺伝子配列の解析を行った。
*Cas9protein : 50ng/ul、sgRNA: 5ng/ul
観察した10個の受精卵のうち9個で蛍光の消失が確認された。また、eGFPの蛍光が消失した細胞のターゲット領域のシークエンス解析で変異導入が確認された。
データ提供  東海大学医学部医学科基礎医学系分子生命科学　大塚正人 様
▼使用例-ゼブラフィッシュ
2つの遺伝子(spns2：心臓形成に関与、tyr：色素形成に関与)に対するGENOME CRAFT Cas9 protein 、Type CT(crRNA+tracrRNA)を 混合してゼブラフィッシュ胚(1-2細胞期)にインジェクションし、発生の様子を観察した。
 No-injection
 GenomeCraft *
*Cas9protein : 400pg、tracerRNA: 100pg
crRNA spns2 : 25pg、crRNA tyr: 25pg
受精1日後(上段)にGFPで染色された心臓の形成異常(白矢印)が、2日後(下段)には目の色素形成異常(黒矢印)が観察された。これらはそれぞれspns2欠損、tyr欠損の表現型と同一である。
データ提供  山梨大学大学院 総合研究部 発生生物学　川原敦雄 様
弊社の「Genome craft」シリーズはERS genomics社からのライセンシングを受けて、製造・販売しております。

■長鎖RNA合成

in vitro転写法による長鎖RNA合成サービス。50~1500ntの鎖長に対応。
ゲノム編集用のgRNA、RT-PCRの増幅コントロールRNA、mRNA調製など様々な用途に利用可能。
お持ちのプラスミドクローンを受入して鋳型として調整も行います。
より長いRNA、増量合成、5’capやpolyA-tail等、ご要望承ります。
長さ 納品保証量 価格（税別） 鋳型DNA 納期
50～120nt 20μg 40,000円 合成オリゴDNA (追加費用無) 10営業日
121～1500nt 40μg 70,000円 人工遺伝子合成 (費用別途 参照) 10営業日 (鋳型DNA受領後)
＞＞詳しいサービス内容を確認する　長鎖RNA合成 
▼使用例-長鎖RNA
GFP遺伝子配列のRNAを合成して5’cap、polyA-tailを付加後、
リポフェクション法により培養細胞に導入しました。
導入後5時間程度で緑色の蛍光が観察できました。
 

ノックイン（ドナーDNA合成・ターゲティングベクター作製）

■ドナーDNA（ssODN　一本鎖オリゴドナーDNA）合成

塩基置換やloxPサイト等、数十塩基までの配列をノックインするドナーDNAとしてご利用可能。
ヌクレアーゼ耐性修飾(Phosphorothioate)のご希望も承ります。
＞＞詳しいサービス内容を確認する　GenomeCraft　ドナーDNA
 

■ドナーDNA（ssDNA　一本鎖DNA）作製

化学合成では対応できない鎖長（~4000nt）に対応しております。
変異がないことを確認したクローンDNAを鋳型に調整する為、高精度の一本鎖DNAをご提供。
一本鎖DNAを用いる事で比較的簡単に効率良くノックインが起こることが報告されています。
＞＞詳しいサービス内容を確認する　GenomeCraft　ドナーDNA
 

■ターゲティングベクター作製

遺伝子ノックアウトやノックイン等、遺伝子ターゲティング用のドナーDNAを作製します。
レポーター遺伝子導入による可視化、遺伝子カセットの導入によるコンディショナル発現制御等。
ご希望のデザインに応じてベクター構築をいたします。
＞＞詳しいサービス内容を確認する　GenomeCraft　ドナーDNA
 

ジェノタイピング解析（電気泳動・サンガーSeq・NGS解析・RAISING法）

■ジェノタイピング解析各種

組織片、培養細胞ペレット等を検体としてお送りいただき、DNA抽出、PCR、変異検出を行います。
解析希望内容に応じて最適な解析プラン（電気泳動・サンガーSeq・NGS解析）を用意しております。
生物種、ターゲット配列、変異種などジェノタイピング解析の目的に合わせたプライマー作製も可能。
＞＞詳しいサービス内容を確認する　ジェノタイピング解析

■RAISING法

国立感染症研究所とファスマックの共同研究により開発した外来DNAの挿入位置を決定する方法です。
NGS解析と組み合わせる事によりゲノム編集におけるノックインのオフターゲット検出に応用出来ます。
＞＞詳しいサービス内容を確認する　RAISING法

資料ダウンロード

以下から応用技術サービスの資料をダウンロードいただけます。
【ご注文】
Genome craftシリーズのご依頼につきましては、以下、発注書(Excelファイル)をダウンロードいただき、必要事項をご記入の上、
弊社まで にてお送りください。
>>GENOME CRAFT 製品発注書(Excelファイル)
その他のサービスにつきましては下記、問い合わせ先までお気軽にご連絡ください。
【問い合わせ】
株式会社ファスマック　ゲノム編集サービス
〒243-0021 神奈川県厚木市岡田3088 ケーオービルA棟4階
TEL 046-281-9901/FAX 046-281-9931